冰冻切片he染色(冰冻切片he染色皱缩)

你们好，最近小活发现有诸多的小伙伴们对于冰冻切片，冰冻切片这个问题都颇为感兴趣的，今天小活为大家梳理了下，一起往下看看吧。

1、 绘制材料

2、 应尽快取新鲜材料，防止死后组织发生变化。

3、 使急速冷冻

4、 1.将组织块平放在软塑料瓶盖或特制的小盒子(直径约2cm)中。

5、 2.如果组织块较小，加入OCT包埋剂浸泡组织，将特制的小盒慢慢铺在装有液氮的小杯中。

6、 3.当盒子底部与液氮接触时，它开始蒸发和沸腾。此时，保持小盒子在原位，不要浸入液氮中。该组织将在大约10-20秒内迅速冻结成块。

7、 4.冰冻块制成后，可以放入低温切片机冰冻切片。

8、 5.如需保存，应迅速用铝箔或塑料薄膜包好，立即放入-80冰箱保存备用。

9、 固定的；不变的

10、 1.在样品架上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织放在上面，放入4冰箱预冷5-10分钟，让OCT胶浸透组织。

11、 2.取出组织放在锡纸或载玻片上，快速冷冻样品架。

12、 3.将组织放在样品架上，在上面加一层OCT胶，完全覆盖为宜。放在速冻架(PE)上30分钟。

13、 切片

14、 1.恒温冰冻切片机比较理想冰冻切片机。它的基本结构是切片器放置在低温密闭室内，所以切片时不受外界温度和环境的影响，可以连续切片到5-10 m。

15、 2.切片时，低温室内温度应为-15 ~-20。如果温度太低，组织很容易破裂。防卷板的位置和角度要合适。载玻片应该贴在组织切片上，所以不要上下移动。

16、 3.切割后室温静置30分钟，在4的丙酮中固定5-10分钟，在烘箱中干燥20分钟。PBS洗涤5min3次。

17、 4.进行抗原热修复或微波热修复，室温下自然冷却。用3%H2O2孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。

18、 免疫荧光染色

19、 1.冰冻切片室温风干15分钟，室温下用含10%正常山羊血清的PBS切片1h(此步骤可选)。

20、 2.滴加适当比例的稀释后的一抗或一抗工作液(抗体量视组织大小而定，原则是能均匀覆盖组织表面，保证整个过程中组织不会干涸)。

21、 3.将切片放入含PBS的免疫组织化学湿盒中，室温孵育2小时或4过夜。

22、 4.第二天，将湿盒37放置1小时，吸附芯片上的一抗进行回收，将芯片插入小染缸进行PBS洗涤。

23、 5.滴加用PBS(深色)稀释的第二抗体，在分子杂交箱中37孵育1小时。回收二抗，染缸切片，PBS洗5min3次。

24、 6.滴加DAPI工作液对细胞核进行染色，室温下10-20min(0.1%工作浓度染色15min)。

25、 7.回收DAPI，滴加5-10l抗荧光衰减密封片或中性胶，用干净盖玻片密封薄膜，在荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察并拍照。

26、 8.将准备好的切片放入切片盒中，放入4冰箱冷藏一周左右。

以上就是冰冻切片这篇文章的一些介绍，希望能帮助到大家。